安捷伦1260液相色谱仪是一种高效的分离和分析技术,通过在固定相(色谱柱)和流动相(溶剂)之间相互作用,实现对混合物中成分的分离和检测。HPLC在各种领域的科学研究和工业生产中发挥着重要作用。其基本原理是利用化合物在固定相(通常是填充在色谱柱中的吸附剂)和流动相(溶剂)之间的分配系数差异,实现化合物的分离。样品混合物在色谱柱中受到不同程度的吸附和解吸作用,从而在柱中分离成各个成分。检测器检测这些分离的化合物,并生成相应的信号。
1、流动相准备
溶剂纯度:使用的溶剂必须达到色谱纯(LC)级别。
过滤脱气:所有溶剂在使用前需经过0.45微米滤膜过滤,并通过超声脱气10-20分钟。这有助于去除杂质和溶解的气体,防止气泡影响泵和检测器的性能。
溶剂连接:确保A管连接有机相,B管连接水相,并且溶剂完q浸没吸滤头。
2、设备操作
开机连接:打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道和检测系统。
冲洗泵阀:如果长时间未用或更换新的流动相,需先冲洗泵和进样阀。冲洗泵时,直接在泵的出水口用针头抽取溶剂;冲洗进样阀时,在控制界面中点击purge后再点击start,速度不要超过10 ml/min。
调节流量:初次使用新流动相时先测试压力,流速不宜过大,通常不超过2000 psi,然后选择合适的流速并走基线,观察基线情况。
3、方法设计
设定方法:在控制界面选择或创建合适的走样方法,包括进样前的稳流、基线归零、进样阀的loading-inject转换和走样时间。
样品处理:所有样品需经过滤后才可进样。进样后按照设定的方法进行分析,并在完成后记录数据和做标记[postrun],最后再用基线方法洗掉剩余物。
4、维护保养
环境条件:保持仪器工作环境干净、温度适宜,避免振动和阳光直射。
定期检查:定期检查和维护泵、检测器及管路,确保没有泄漏或堵塞。
清洗部件:定期清洗泵、阀门和检测器等关键部件,保持其清洁无污染。